冠狀病毒

冠狀病毒

冠狀病毒在系統分類上屬冠狀病毒科(Coronaviridae)冠狀病毒屬(Coronavirus)。冠狀病毒屬的病毒是具外套膜(envelope)的正鏈單股RNA病毒,直徑約80-120nm,其遺傳物質是所有RNA病毒中最大的,隻感染人、、豬、貓、犬、類脊椎動物。冠狀病毒的一個變種是引起非典型肺炎的病原體。

冠狀病毒最先是1937年從雞身上分離出來,在1965年已被分離出來,但人們目前對它們的認識相當有限。已知有兩種冠狀病毒會影響人類,2/3早產兒的普通感冒與呼吸道感染是由這兩種病毒所引起。

冠狀病毒有包膜,包膜上存在棘突,不同的冠狀病毒的棘突有明顯的差異。在冠狀病毒感染細胞內有時可以見到管狀的包涵體。這類病毒具有胃腸道、呼吸道和神經系統的嗜性。

截止到2013年底,全球新型冠狀病毒確診病例已達176例,其中死亡74例。

  • 中文名稱
    冠狀病毒
  • 外文名稱
    coronavirus
  • 直徑
    60-200nm
  • 不規則形狀
    不規則形狀

基本簡介

冠狀病毒在系統分類上屬冠狀病毒科(Coronaviridae)冠狀病毒屬(Coronavirus)。冠狀病毒的一個變種是引起非典型肺炎的病原體。冠狀病毒最先是1937年從雞身上分離出來,病毒顆粒的直徑60-200nm,平均直徑為100nm,呈球形或橢圓形,具有多形性。病毒有包膜,包膜上存在棘突,整個病毒像日冕,不同的冠狀病毒的棘突有明顯的差異。在冠狀病毒感染細胞內有時可以見到管狀的包涵體。

冠狀病毒冠狀病毒

已知有兩種冠狀病毒會影響人類,2/3早產兒的普通感冒與呼吸道感染是由這兩種病毒所引起。目前所知,冠狀病毒科隻感染脊椎動物,與人和動物的許多疾病有關。自1980年在德國召開第一屆國際冠狀病毒討論會以來,日益受到醫學、獸醫學和分子生物學家的廣泛重視。這類病毒具有胃腸道、呼吸道和神經系統的嗜性。兒童的冠狀病毒感染並不常見。但是,5-9歲兒童有50%可檢出中和抗體,成人中70%中和抗體陽性。

冠狀病毒感染分布在全世界多個地區,中國以及英國、美國、德國、日本、俄羅斯、芬蘭、印度等國均已發現本病毒的存在。該病毒引起的感染主要發生在冬季和早春。在美國密執安州的一次家庭檢查中,證明冠狀病毒可以感染各個年齡組,0-4歲佔29.2%,40歲以上佔22%,在15-19歲年齡組發病率最高。這與其它上呼吸道病毒的流行情況不盡相同,例如呼吸道合胞病毒,大多隨著年齡的增加而發病率降低。另外,當冠狀病毒流行時鼻病毒卻不常見。

冠狀病毒也是成人慢性氣管炎患者急性加重的重要病原。研究表明,這次在全球多個國家和地區引發非典型肺炎的冠狀病毒並不是人們已知的兩類,一如外界的猜測,它是人類未曾接觸過的新品種病毒。而此前有專家認為是“副粘病毒群”或“間質肺炎病毒”,但最終因證據不足而被推翻。

研究歷史

冠狀病毒最先是1937年從身上分離出來。而鼻病毒是50年代發現的。人們首先發現鼻病毒與感冒有關,但是隻有大約50%的感冒由鼻病毒引起。1965年,Tyrrell等用人胚氣管培養方法,從普通感冒病人鼻洗液中分離出一株病毒,命名為B814病毒。隨後,Hamre等用人胚腎細胞分離到類似病毒,代表株命名為229E病毒。1967年,Mclntosh等用人胚氣管培養從感冒病人中分離到一批病毒,其代表株是OC43株。1968年,Almeida等對這些病毒進行了形態學研究,電子顯微鏡觀察發現這些病毒的包膜上有形狀類似日冕的棘突,故提出命名這類病毒為冠狀病毒。
  1975年國家病毒命名委員會正式命名了冠狀病毒科。根據病毒的血清學特點和核苷酸序列的差異,目前冠狀病毒分為冠狀病毒和環曲病毒兩個屬。

冠狀病毒

形態結構

冠狀病毒粒子呈不規則形狀,直徑約60-220nm。病毒粒子外包著脂肪膜,膜表面有三種糖蛋白:刺突糖蛋白(S,Spike Protein,是受體結合位點、溶細胞作用和主要抗原位點);小包膜糖蛋白(E,Envelope Protein,較小,與包膜結合的蛋白);膜糖蛋白(M,Membrane Protein,負責營養物質的跨膜運輸、新生病毒出芽釋放與病毒外包膜的形成)。少數種類還有血凝素糖蛋白(HE蛋白,Haemaglutinin-esterase)。冠狀病毒的核酸為非節段單鏈(+)RNA,長27-31kd,是RNA病毒中最長的RNA核酸鏈,具有正鏈RNA特有的重要結構特征:即RNA鏈5’端有甲基化“帽子”,3’端有PolyA “尾巴”結構。這一結構與真核mRNA非常相似,也是其基因組RNA自身可以發揮翻譯模板作用的重要結構基礎,而省去了RNA-DNA-RNA的轉錄過程。冠狀病毒的RNA和RNA之間重組率非常高,病毒出現變異正是由于這種高重組率。重組後,RNA序列發生了變化,由此核酸編碼的氨基酸序列也變了,氨基酸構成的蛋白質隨之發生變化,使其抗原性發生了變化。而抗原性發生變化的結果是導致原有疫苗失效,免疫失敗。
  冠狀病毒成熟粒子中,並不存在RNA病毒復製所需的RNA聚合酶(Viral RNA polymerase),它進入宿主細胞後,直接以病毒基因組RNA為翻譯模板,表達出病毒RNA聚合酶。再利用這個酶完成負鏈亞基因組RNA(sub-genomic RNA)的轉錄合成、各種結構蛋白mRNA的合成,以及病毒基因組RNA的復製。冠狀病毒各個結構蛋白成熟的mRNA合成,不存在轉錄後的修飾剪下過程,而是直接通過RNA聚合酶和一些轉錄因子,以一種“不連續轉錄” 的機製,通過識別特定的轉錄調控序列(transcription regulating sequences, TSR),有選擇性的從負義鏈RNA上,一次性轉錄得到構成一個成熟mRNA的全部組成部分。結構蛋白和基因組RNA復製完成後,將在宿主細胞內質網處裝配(assembly)生成新的冠狀病毒顆粒,並通過高爾基體分泌至細胞外,完成其生命周期。

冠狀病毒

臨床特點

冠狀病毒是成人普通感冒的主要病原之一,在兒童可以引起上呼吸道感染,一般很少波及下呼吸道。冠狀病毒感染的潛伏期一般為2至5天,平均為3天。典型的冠狀病毒感染呈流涕、不適等感冒症狀。不同型別病毒的致病力不同,引起的臨床表現也不盡相同,OC43株引起的症狀一般比229E病毒嚴重。有報道冠狀病毒感染可以出現發熱、寒戰、嘔吐等症狀。病程一般在1個星期左右,臨床過程輕微,沒有後遺症。
  冠狀病毒還可以引起嬰兒、新生兒急性腸胃炎,主要症狀是水樣大便、發熱、嘔吐,每天10餘次,嚴重者可以出現血水樣便。
  文獻報告冠狀病毒的感染可以產生以下臨床症狀:
  1) 呼吸系統感染,包括重急性呼吸系統綜合症(SARS);
  2)腸道感染(嬰兒偶爾發生);
  3)神經系統症狀(很少)。
  冠狀病毒通過呼吸道分泌物排出體外,經口液、噴氣、接觸傳染。臨床上,多數冠狀病毒引起輕度和自愈性疾病,但少數可有神經系統並發症。

冠狀病毒

流行病學

冠狀病毒感染在世界各地極為普遍。
  到目前為止,大約有15種不同冠狀病毒株被發現,能夠感染多種哺乳動物鳥類,有些可使人發病。
  冠狀病毒引起的人類疾病主要是呼吸系統感染(包括嚴重急性呼吸綜合征,SARS)。該病毒對溫度很敏感,在33℃時生長良好,但35℃就使之受到抑製。由于這個特徵,冬季和早春是該病毒疾病的流行季節。冠狀病毒是成人普通感冒的主要病原之一,兒童感染率較高,主要是上呼吸道感染,一般很少波及下呼吸道。另外,還可引起嬰兒和新生兒急性腸胃炎,主要症狀是水樣大便、發熱、嘔吐,每天可拉10餘次,嚴重者甚至出現血水樣便,極少數情況下也引起神經系統綜合征。
  病毒的生長多位于上皮細胞內,也可以感染肝髒心髒眼睛,在另外的一些細胞類型(例如巨噬細胞)中也能生長。目前人類冠狀病毒還沒有合適的可作研究用的動物模型(人類疾病的動物模型(animal model of human disease)是指各種醫學科學研究中建立的具有人類疾病模擬表現的動物。動物疾病模型主要用于實驗生理學、實驗病理學和實驗治療學(包括新葯篩選)研究),因此對冠狀病??鼻黏膜細胞,經器官培養才能分離得到。增殖病毒也要用上述材料,亦很困難。
  冠狀病毒的血清型和抗原變異性還不明確。冠狀病毒可以發生重復感染,表明其存在有多種血清型(至少有4種已知)並有抗原的變異,其免疫較困難,目前尚無特異的預防和治療葯物。

傳播途徑

冠狀病毒通過呼吸道分泌物排出體外,經口液、噴嚏、接觸傳染,並通過空氣飛沫傳播,感染高峰在秋冬和早春。病毒對熱敏感,紫外線、來蘇水、0.1%過氧乙酸及1%克遼林等都可在短時間內將病毒殺死。

預防措施

對其預防有特異性預防,即針對性預防措施(疫苗,疫苗的研製是有可能的,但需要時間較長,解決病毒繁殖問題是其難題)和非特異性預防措施(即預防春季呼吸道傳染疾病的措施,如保暖、洗手、通風、勿過度疲勞及勿接觸病人,少去人多的公共場所等)。

親緣關系

世界衛生組織宣布,正式確認冠狀病毒的一個變種是引起非典型肺炎的病原體。科學家們說,變種冠狀病毒與流感病毒有親緣關系,但它非常獨特,以前從未在人類身上發現,科學家將其命名為"SARS病毒"(SARS是"非典"學名的英文縮寫)。1965年,醫學專家用人胚氣管培養方法,從普通感冒病人鼻涕液中分離出一株病毒,命名為B814病毒。隨後,Hamre等用人胚腎細胞分離到類似病毒,代表株命名為229E病毒。1967年,Mclntosh等用人胚氣管培養從感冒病人中分離到一批病毒,其代表株是OC43株。1968年,Almeida等對這些病毒進行了形態學研究,電子顯微鏡觀察發現,這些病毒的包膜上有形狀類似日冕的棘突,故提出命名這類病毒這冠狀病毒。香港衛生專家排除了它與甲型流感和乙型流感病毒有關的可能性,與1997年出現的H5N1禽流感病毒也沒有聯系。國家曾于1975年正式命名了冠狀病毒科。據香港衛生官員說,非典型肺炎通常由病毒引起,例如流感病毒、腺病毒和其他呼吸道病毒。非典型肺炎也可能由生物體引起。冠狀病毒感染在全世界非常普遍,人群中普遍冠狀病毒抗體,成年人高于兒童。各國報道的人群抗體陽性率不同,我國人群以往冠狀病毒抗體陽性率在30%至60%,前蘇聯的抗體陽性率則在53%至97%。
  1937年,冠狀病毒(Coronaviruses)首先從雞身上分離出來。1965年,分離出第一株人的冠狀病毒。由于在電子顯微鏡下可觀察到其外膜上有明顯的棒狀粒子突起,使其形態看上去像中世紀歐洲帝王的皇冠,因此命名為“冠狀病毒”。
  1975年,病毒命名委員會正式命名了冠狀病毒科。根據病毒的血清學特點和核苷酸序列的差異,目前冠狀病毒科分為冠狀病毒和環曲病毒兩個屬。冠狀病毒科的代表株為禽傳染性支氣管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus, IBV)。
  在2002年冬到2003年春肆虐全球的嚴重急性呼吸綜合征(Severe Acute Respiratory Syndrome,SARS,傳染性非典型肺炎)就是冠狀病毒科,冠狀病毒屬中的一種。

冠狀病毒

病毒檢測

介紹

貓傳染性腹膜炎(FIP)是目前導致貓死亡的重要原因之一,從3個月到3齡貓以及大于10齡貓,特別是發生在那些純種貓和其它數量及種類繁多但養在一起的家養貓。貓冠狀病毒FeCV(Feline enteric Coronavirus)是高度傳染性病毒而且偏好發生在數量及種類繁多而且養在一起的家養貓。FeCV給貓帶來了極大的危險,FeCV陽性通常被認為是FIP的前奏。要控製貓FIP最根本的方法就是要做好FeCV的預防和控製。FeCV是廣泛的貓冠狀病毒Feline Coronavirus (FCoV)中的一種,FeCV抗體的存在僅表示有FeCV病毒存在和/或感染了FIP的可能性。對FeCV抗體呈陽性結果也不一定表示貓得到了FeCV病毒和/或感染了FIP,應該要和其它臨床症狀結合起來一齊判斷。但陰性結果可說明沒有FeCV病毒和/或感染了FIP。

檢測

酶標板的孔中包被有純化的冠狀病毒抗原。從金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus提取的蛋白A與HRP結合成復合物。血清或血漿樣品和蛋白A酶標記物一起在酶標板的孔中孵育。如果貓樣品裏存在FCoV抗體,抗體將與孔中的抗原結合,再與蛋白A酶標記物結合。多餘的酶標記蛋白A被洗掉,加入發色底物。清晰的藍色表示FCoV抗體存在,沒有顏色變化表明沒有FCoV抗體。 該試劑盒具有高特異性和靈敏度,操作簡單,30分鍾內可以知道結果。試劑盒裏包括陽性質控和陰性質控,僅需肉眼通過與陰性質控顏色進行比較,就可以準確地判斷樣品裏FCoV抗體的存在。

樣品

需1ul血清或血漿,隻能檢測貓的樣品。樣品可在2-8C儲存7天,如果需要更長的儲存,樣品可儲存在-20C。嚴重紅細胞溶解或脂溶血會產生幹擾的顏色,所以盡可能去得到更好質量的樣品。

準備

讓洗滌濃縮液達到室溫,輕輕地倒置混勻。用蒸餾水或去離子水稀釋洗滌濃縮液(1份洗滌濃縮液加至9份水中),稀釋後的洗滌液可儲存于2-7C。

結果

a. 檢測的有效性必須是:陽性質控孔裏的液體呈清晰的藍色,而陰性質控孔裏的液體保持清澈。 b. 假若樣品孔的顏色變化比陰性質控孔深很多則表明,該動物以前或目前正受到FCoV感染,並且有可能通過排泄物傳播病毒。此時便需要與其它的臨床資料結合起來以確診FIP。 c. 如果樣品孔裏無顏色變化表明沒有感染FIP疾病。

組份

以下內容物包含在試劑盒裏: 包被好的酶標板 8x12孔 陽性質控血清 1.5ml 陰性質控血清 7.0ml 蛋白A HRP標記物 5.0ml TMB 7.0ml 底物緩沖液 7.0ml 濃縮洗滌液 100.0ml

註意

* 試劑盒使用前恢復至室溫(21-25C) * 不同樣品使用不同的加樣器頭 * 不要把試劑盒直接暴露在陽光下 * 不要使用過期的試劑或不同試劑盒裏試劑一齊混雜使用 * 嚴格按照步驟操作,不適當的洗滌或試劑污染將產生非專一性的顏色 * 僅限獸醫使用

儲存

將試劑盒和稀釋的洗滌液儲存于2-7C,不要冷凍。隻要在適當儲存條件下,試劑在有效期內是穩定的。

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